Analiza Proteinelor prin spectrometria FT-IR
Vibratiile moleculare in spectrometria FT-IR sunt masurate prin absorbtia specifica a radiatiei infrarosii de catre legaturile chimice. Intrucat tehnica IR se supune legii Lambert-Beer, spectrul proteinelor poate fi utilizat pentru determinarea concentratiei acestora. Astfel se pot determina concentratii ale proteinelor in domeniul 0,1 mg/ml - >100mg/ml direct din solutia nediluata, in cateva secunde si fara nici o tehnica de colorare imuno- sau biochimica.
Mai mult, informatiile continute in spectrul IR al proteinelor nu se limiteaza la doar banda I a gruparii amidice. Configuratia lanturilor de aminoacizi poate fi de asemenea monitorizata direct si comparata in diferite conditii de mediu (pH, saruri, liganzi) sau in proteine mutante, cu secventa primara modificata.
Analiza in infrarosu a proteinelor se face cu usurina si este o modalitate relativ ieftina de a studia proteinele in medii apoase.
Spectroscopia FT-IR este foarte utila in observarea efectelor structurale asupra proteinelor, in timp ce acestea se leaga de medicamente sau interactioneaza cu diferite substraturi si/sau inhibitori. De asemenea, cu ajutorul spectrometriei IR se poate monitoriza in timp real formarea structurilor multimerice, cum ar fi agregatele sau fibrilele. Merita subliniat faptul ca aceste investigatii nu se limiteaza la studiul proteinelor solubile in apa, putand fi efectuate studii si pe proteinele de membrana.
CONFOCHECK este sistemul FT-IR conceput special pentru analiza proteinelor in solutii apoase. Designul sau special combinat cu o interfata software usor de utilizat faciliteaza achizitia rapida a datelor pe un numar mare de probe. Exemple de aplicatii pentru CONFOCHECK:
- Dinamica proteinelor (de ex. influenta temperaturii asupra modificarilor conformationale);
- Cuantificarea proteinelor (de la 0,03mg/ml pana la >100mg/ml in solutii apoase);
- Determinarea structurii secundare a proteinelor;
- Monitorizarea modificarilor conformationale in timpul procesului de agregare, precipitare si cristalizare a proteinelor.